色谱填充柱采用和严格的填充技术,确保了柱间的重现性和高柱效,而经过处理的不锈钢管线可以改善惰性和峰形。一般分为填充柱和毛细管柱,填充柱适合常规样品的定量分析,尤其是高纯度的样品;毛细管柱适合分离组成比较复杂或微量样品以及残留分析等。目前来说,在常规样品和高纯样品的定量分析时,经常使用的还是填充柱。
填充柱采用固体物质作为固定相,包括具有吸附活性的无机吸附剂、高分子多孔微球和表面被化学键合的固体物质。所用的填料是液体固定相,它是由惰性的固体支持物和其表面上涂渍的高沸点有机物液膜所构成。定量分析的准确度较高,特别是在某些领域(例如气体分析、痕量水分析)具有*的用途。从发展上看虽然毛细管柱有逐步取代填充柱的趋势,但至少在目前一段时期内,色谱填充柱在日常分析中仍是一种十分有价值的分析分离手段。
该技术是经过研究和多年生产实践发展起来的。填装均匀,密度适宜;固定液配比合理,涂布均匀。确保产品在正常的使用条件下具有更佳的稳定性、分离性、使用寿命长。柱效受填充柱柱内外因素影响,为使色谱柱达到理想效率,除柱外死体积要小外,还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使好的装填技术,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
安装:填充柱在进样器和检测器两处的安装是类似的。色谱填充柱的进样器一端应留出足够的一段空柱(至少50mm),以防插入的注射器针触到填在柱端的玻璃纤维或柱填充物;在检测器一端,也应留出足够的一段空柱(至少40mm),以防喷嘴底端触到填在柱端的玻璃纤维或柱填充物。